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如何選擇DNA提取方法
2023-10-25
DNA的提取可以簡單的分為裂解和純化兩大步驟，裂解是破壞樣品細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而使樣品中的DNA游離在裂解體系中的過程，純化則是使DNA與裂解體系中的其它成分，如蛋白質(zhì)、鹽及其它雜質(zhì)分離的過程。那么該如何選擇DNA提取方法呢？讓我們一起來看看吧！一、酚氯仿抽提法酚氯仿抽提是去除蛋白質(zhì)的有效手段，但如果蛋白質(zhì)含量超過了其飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)就不會被一次性去除，需要進(jìn)行多次反復(fù)抽提，而每次的抽提均會導(dǎo)致核酸的損失。酚氯仿抽提的優(yōu)勢是成本低廉，對實(shí)驗(yàn)條件要求較低。二、高鹽沉淀法高鹽...
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熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么？
2023-10-24
熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）是一門新興的分子細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀(jì)80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么你知道熒光原位雜交（FISH）的實(shí)驗(yàn)步驟是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.實(shí)驗(yàn)用具及材料（1）人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色體細(xì)胞標(biāo)本；（2）指甲油、甲酰胺、氯化鈉、檸檬酸鈉、*、吐溫20等；（3）恒溫水浴鍋、培養(yǎng)箱、染色缸、載玻...
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蛋白表達(dá)的常見問題有哪些？
2023-10-24
蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)的時(shí)，有時(shí)候?qū)嶒?yàn)會覺得參考實(shí)驗(yàn)方法和克隆的蛋白基因序列wan全沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結(jié)果。下面讓我們一起來看看蛋白表達(dá)的常見問題有哪些吧！1、載體構(gòu)建錯(cuò)誤，很多克隆新人經(jīng)常弄錯(cuò)讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其克隆位點(diǎn)常有一兩個(gè)堿基的區(qū)別；另外有些酶產(chǎn)生粘端有些酶產(chǎn)生平端，這些都容易導(dǎo)致讀碼框錯(cuò)誤，從而表達(dá)不出來。2、宿主菌選擇不當(dāng)，不同的宿主菌其基因型是不一樣的。有些經(jīng)過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇合適的宿...
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PCR反應(yīng)體系主要是什么？
2023-10-23
你知道PCR反應(yīng)體系主要包含那些嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板（template)模板即擴(kuò)增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質(zhì)粒DNA等)或RNA（如總RNA、mRNA、tRNA、rRNA、病毒RNA等），但必須符合兩個(gè)條件：一是純度必須較高，二是濃度不能太高以免抑制。模板是待擴(kuò)增的目的基因或特異片段，如診斷病人是否攜帶有突變基因時(shí)，其模板就是提取的病人血液中的DNA或RNA片段。PCR對模板DNA的純度不要求很高，但應(yīng)盡量不含有對PCR反應(yīng)有抑制作用的雜...
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PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么？
2023-10-23
你知道PCR技術(shù)的基本原理、各步驟的目的是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、PCR技術(shù)基本原理PCR是一種選擇性體外快速擴(kuò)增DNA片段的方法。在體外以類似于細(xì)胞內(nèi)DNA的半保留復(fù)制過程，以擬擴(kuò)增的模板DNA分子，與模板DNA互補(bǔ)的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應(yīng)體系，經(jīng)過重復(fù)地變性一退火一延伸三步，擴(kuò)增新的目的DNA鏈，這個(gè)過程通過控制反應(yīng)體系的溫度來實(shí)現(xiàn)。PCR包含下列三步反應(yīng)：1、變性(denaturation)將反應(yīng)體系混合物經(jīng)加熱至94...
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如何選擇免疫組化中的一抗？
2023-10-20
免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來看看吧！一、單克隆和多克隆抗體的選擇存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的抗體，就是...
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細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么？
2023-10-20
你知道細(xì)胞胞內(nèi)染色操作流程是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞計(jì)數(shù)將培養(yǎng)好的細(xì)胞收集于15mL離心管并計(jì)數(shù)；500g離心4min，去上清。二、制備單細(xì)胞懸液將收集的細(xì)胞用1mL0.5%BSA/PBS溶液重懸，400g離心3min，去上清，重復(fù)2次；用0.5%BSA/PBS溶液重懸細(xì)胞至濃度1x106個(gè)細(xì)胞/mL，分配到96孔板中，每孔100μl細(xì)胞懸液，400g離心5min去上清。三、固定每孔加入100μl細(xì)胞固定劑重懸細(xì)胞，2-8°孵育20min。四、洗滌400g離心5m...
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免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些？
2023-10-19
免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)是一種使用熒光抗體或染料來檢測細(xì)胞內(nèi)靶抗原的技術(shù)。那么你知道免疫細(xì)胞（ICC）實(shí)驗(yàn)步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞培養(yǎng)/固定很多抗原在離體組織中只存在很短時(shí)間，自溶（autolysis）和壞死（necrosis）使得抗原進(jìn)一步降解，組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)被破壞。樣品浸泡在合適的固定液中，固定液完quan滲透組織，使蛋白失去活性，并且使組織被保存、穩(wěn)定在接近invivo狀態(tài)。二、通透處理通透即為對細(xì)胞膜進(jìn)行打孔處理，使抗體能進(jìn)入到細(xì)胞中和抗原發(fā)生結(jié)合。通...
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