-
蛋白質(zhì)純化有哪些步驟呢？
2023-09-06
蛋白質(zhì)純化是利用基因工程技術(shù)將編碼蛋白質(zhì)的核酸序列導(dǎo)入宿主細胞，使其大量表達，然后采用合適的純化方法進行體外純化，以獲得高純度、高活性和高產(chǎn)量的蛋白質(zhì)的過程。那么你知道蛋白質(zhì)純化操作步驟嗎？讓我們一起來看看吧！1、構(gòu)建原核表達質(zhì)粒：目的基因PCR，載體酶切，連接，轉(zhuǎn)化，挑單克隆送測序；2、將構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21（DE3）中，37℃培養(yǎng)過夜，挑單克隆小搖過夜；3、小誘導(dǎo)摸索最佳誘導(dǎo)條件：將搖過夜的菌液1:1000接種到3mLLB中，37℃搖4-5h至菌液OD600=0....
-
如何區(qū)分非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker？
2023-09-06
蛋白Marker是蛋白分子量標(biāo)準，是一些已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物，像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。那么如何區(qū)分非預(yù)染蛋白Marker和預(yù)染蛋白Marker呢？讓我們一起來看看吧！非預(yù)染蛋白Marker：是幾種已知分子量并純化好的蛋白質(zhì)預(yù)混液，方便不同大小的蛋白比較。非預(yù)染的Marker使用上不如預(yù)染Marker好用，因為電泳過程中完quan看不到，電泳結(jié)束后經(jīng)過蛋白染色后才能起指示作用，無法在實驗過程中起預(yù)示參照作用，屬于“后知后覺”型的。但是由于蛋白沒有附帶染料分...
-
你知道如何正確使用移液槍嗎？
2023-09-04
移液槍是實驗室必*好工具，是檢驗人的好朋友，配質(zhì)控、加樣都離不開移液槍的幫助，那么你知道怎么才能正確的使用移液槍嗎？讓我們一起來看看吧一、裝吸頭移液器套柄用力下壓，需要時小幅度旋轉(zhuǎn)即可。錯誤操作：用力敲擊吸頭。此方法會帶來吸頭損壞甚至移液器套柄磨損，從而影響其密封性。不可以把槍頭提起來，再往下用力懟槍頭盒，這個非常錯誤二、吸頭浸入角度吸液時盡量保持垂直狀態(tài)，傾斜角度不能超過20°三、吸液速度勻速連貫吸液，控制好吸液速度，太快會造成噴液，液體或者氣霧沖入移液器內(nèi)部，污染活塞等部...
-
你知道什么是ELISA嗎？
2023-09-04
酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。這一方法的基本原理...
-
腺相關(guān)病毒（AAV）滴度快速檢測試劑盒的介紹
2023-09-01
腺相關(guān)病毒（adeno-associatedvirus，AAV）,也稱腺伴隨病毒,屬于微小病毒科依賴病毒屬,是目前發(fā)現(xiàn)的一類結(jié)構(gòu)最jian單的單鏈DNA缺陷型病毒，需要輔助病毒（通常為腺病毒）參與復(fù)制。那么想要真正準確可靠地檢測腺相關(guān)病毒（AAV）滴度該怎么辦呢？讓我們一起來看看吧！AAV基因組為4.8kb的線狀單鏈DNA；AAV免疫原性低，基因持續(xù)表達半年以上；AAV具有多種血清型，可以特異性靶向感染不同的組織或器官，是動物活體基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的shou選工具！腺相關(guān)病毒血清型眾多...
-
免疫熒光（IF）實驗常見問題有哪些？解決方案有什么？
2023-09-01
免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素，制成熒光抗體，再用這種熒光抗體（或抗原）作為探針檢測組織或細胞內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。那么你知道在免疫熒光（IF）實驗中會遇到那些問題以及這些問題的解決方法嗎？讓我們一起來看看吧！問題一：目標(biāo)蛋白熒光很弱，導(dǎo)致組間差異不顯著，導(dǎo)致假陰性結(jié)果解決方案：出現(xiàn)這種情況后，首先檢查抗體是否正確，是否適用于預(yù)處理的組織。有些抗體只適用于冰凍切片，但如果應(yīng)用于石蠟切片，則會出現(xiàn)弱標(biāo)記或無標(biāo)記現(xiàn)象。然后通過文獻了解目的...
-
如何選擇熒光蛋白？
2023-08-31
熒光標(biāo)記在生物學(xué)眾多的研究領(lǐng)域中有著十分廣泛的應(yīng)用，已經(jīng)成為研究體內(nèi)或細胞成像及生物細胞功能的重要工具。熒光標(biāo)記方式一般有兩種，一種是細胞表達的熒光蛋白，另外一種是化學(xué)合成的熒光分子，此外，螢光素酶也是細胞標(biāo)記的常用方法。每一種熒光分子都有其獨te的激發(fā)波長和發(fā)射波長。螢光素酶不同于熒光分子，其發(fā)光機制是利用酶與底物的反應(yīng)，催化發(fā)出的化學(xué)發(fā)光，其發(fā)光并不需要激發(fā)光的參與，常用于體內(nèi)成像及螢光素酶報告基因的定量實驗。熒光蛋白如何選擇呢？讓我們一起來看看吧！一、激發(fā)波長/發(fā)射波長...
-
DNA提取試劑盒，應(yīng)該如何選？
2023-08-30
實驗室工作中，經(jīng)常會需要用到純化的DNA，這時我們通常需要使用一個商業(yè)的DNA提取試劑盒對目的DNA進行分離純化。市面上有很多類型的提取試劑盒，當(dāng)使用不太熟悉的樣本類型時，選擇合適的盒子是尤為關(guān)鍵的，應(yīng)該如何選擇呢？讓我們一起來看看吧！一、試劑盒組分目前大多數(shù)DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質(zhì)，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒，從實驗室培養(yǎng)的細胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋...
服務(wù)熱線：022-66387942
當(dāng)前位置：
技術(shù)文章
掃碼加微信