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IHC染色不均勻分析
2024-11-22
上次我們分享了IHC未染色或無信號(hào)的原因分析，這次讓我們來看看IHC染色不均勻是為什么吧。一、組織切片制備解釋：組織切片薄厚不均勻→建議：更換刀片二、組織固定1.解釋：酒精固定不足會(huì)產(chǎn)生偽影；→建議：延長固定時(shí)間；嘗試不同的固定液2.解釋：固定延遲導(dǎo)致抗原擴(kuò)散；建議：立即固定組織；可以考慮使用交聯(lián)固定劑三、脫蠟解釋：脫蠟不wan全→建議：使用新鮮的二甲苯四、抗體兼容性解釋：一抗可能結(jié)合其他抗原上的表位→建議：從多抗切換至單抗；嘗試不同的單抗五、透化解釋：細(xì)胞膜被破壞，膜蛋白丟...
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IHC未染色或無信號(hào)原因分析
2024-11-21
IHC未染色或無信號(hào)的原因：一、?抗體問題?：抗體與一抗或二抗不兼容、抗體濃度不合適、抗體失效或儲(chǔ)存不當(dāng)?shù)榷紩?huì)導(dǎo)致無染色。例如，使用抗一抗種屬來源的二抗，確認(rèn)二抗是否識(shí)別一抗的亞型；使用更高濃度的抗體或延長孵育時(shí)間；設(shè)置陽性對照，確?？贵w仍然有效?。二、?抗原修復(fù)不足?：固定步驟可能會(huì)改變抗體識(shí)別的抗原表位，導(dǎo)致抗原修復(fù)不足。使用微波或壓力鍋進(jìn)行抗原修復(fù)，確保使用新鮮配置的修復(fù)液?。三、?樣本處理不當(dāng)?：樣本存放時(shí)間過長、切片制備不當(dāng)（如脫蠟不ce底）、組織切片干片等都會(huì)影響...
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蛋白芯片是什么？
2024-11-21
一、蛋白芯片簡介?蛋白芯片?是一種高通量的蛋白質(zhì)功能分析檢測技術(shù)，主要用于監(jiān)測蛋白質(zhì)之間的相互作用。其基本原理是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于載體上，然后利用標(biāo)記了特定熒光物質(zhì)的抗體與芯片上的蛋白質(zhì)結(jié)合，通過熒光強(qiáng)度分析蛋白質(zhì)的表達(dá)數(shù)量和相互作用關(guān)系?。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通過將已知的蛋白質(zhì)分子固定在固相載體上，然后捕獲與之特異性結(jié)合的待測蛋白質(zhì)。這些待測蛋白質(zhì)可能存在于血清、血漿、尿液等生物樣本中。通過洗滌和純化步驟后，利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術(shù)測定各點(diǎn)的熒光強(qiáng)度...
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如何提取細(xì)胞核蛋白？
2024-11-20
本文介紹一下用勻漿器研磨法提取貼壁細(xì)胞核蛋白的具體操作。一、前期準(zhǔn)備1、臺(tái)盼藍(lán)染液：取臺(tái)盼藍(lán)粉劑，將其溶解在10mL的雙蒸水當(dāng)中配制成質(zhì)量體積比為4%（4%w/v）的臺(tái)盼藍(lán)母液。在使用時(shí)，利用PBS緩沖液將母液稀釋10倍，使其濃度達(dá)到0.4%，之后再與細(xì)胞懸液混合均勻。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值為7.9）、1.5mmol/L的氯化鎂、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。若擔(dān)心漿蛋白降解會(huì)對核蛋白產(chǎn)生影響...
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細(xì)胞凋亡的檢測
2024-11-19
一、光學(xué)顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時(shí)可碎裂。檢測方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測量工具可作凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。二、視頻時(shí)差顯微技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中常用，通過相差顯微鏡可動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。檢測方法：收集2×10^5細(xì)胞/ml培養(yǎng)的細(xì)胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動(dòng)攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動(dòng)態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影...
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PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的嵌合體是什么？
2024-11-18
PCR實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產(chǎn)生的呢？那又如何預(yù)防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的嵌合體是指一個(gè)PCR產(chǎn)物來自兩個(gè)或多個(gè)模板分子，通常是由于延伸未完quan導(dǎo)致的?。這種現(xiàn)象通常發(fā)生在PCR反應(yīng)中，特別是當(dāng)使用多重PCR或復(fù)雜模板時(shí)。嵌合體會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物中含有非預(yù)期的片段，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤的解釋。二、形成原理在PCR反應(yīng)中，DNA模板在...
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流式細(xì)胞儀怎么分選T細(xì)胞?
2024-11-18
上文介紹了流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用，今天讓我們學(xué)習(xí)一下怎么用流式細(xì)胞儀分選T細(xì)胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標(biāo)記：根據(jù)抗體說明書標(biāo)記實(shí)驗(yàn)管?；靹蚝?，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機(jī)檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機(jī)檢測。二、儀...
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流式細(xì)胞術(shù)原理及應(yīng)用
2024-11-15
流式細(xì)胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)原理流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種單細(xì)胞定量分析技術(shù)，該技術(shù)通過測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數(shù)，可以定量分析細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征（如DNA含量、蛋白、細(xì)胞膜、胞漿或胞核抗原表達(dá)量）和功能特征（如細(xì)胞內(nèi)酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數(shù)，進(jìn)行細(xì)胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細(xì)胞分離并計(jì)數(shù)，將感興趣的細(xì)胞分選出來，提供分類比例并進(jìn)行進(jìn)一步分析。二、流式細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用1...
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